În piesa Shakespeare "Macbeth", Macduff alege să fugă în Anglia ca răspuns la uciderea lui Duncan de către Macbeth pentru a merge în sprijinul lui Malcolm, fiul și moștenitorul lui Duncan. Fugându-se în Anglia, însă, Macduff condamnă propria sa familie, care este ucisă de Macbeth ca răspuns. Fugind în Anglia, Macduff încearcă, de asemenea, să-l convingă pe Malcolm să revendice tronul scoțian cu un spectacol de forță.
În piesă, primul dialog al lui Macduff implică descoperirea cadavrului regelui Duncan în castelul lui Macbeth. Decizia lui de a fugi în Anglia se datorează suspiciunii că Macbeth era, de fapt, ucigașul lui Duncan. În timp ce în Anglia și încercând să-l convingă pe Malcolm să acționeze, Macduff este informat despre moartea familiei sale și despre consecința acțiunii sale de către un alt scoțian decât numele lui Ross.
Macduff se întoarce în Scoția alături de Malcolm și aliații lor englezi și îl întâlnește pe Macbeth în luptă la Castelul Dunsinane. Macduff îl ucide în cele din urmă pe Macbeth, deși în joc se întâmplă în afara scenei. Apoi își prezintă capul lui Malcolm și îl declară drept regele de drept al Scoției.
Înainte de asasinarea regelui Duncan de Macbeth, Macduff a deținut titlul de Thane of Fife. Primele referiri la Macduff se regăsesc într-o lucrare din secolul al 14-lea numită "Chronica Gentis Scotorum".
