Enzima ADN helicase dezlipeste helixul dublu ADN pentru a permite replicarea acestuia. helicaza ADN-ului are o viteza de rotatie de 10.000 de rotatii pe minut si se deplaseaza in fata furcii de replicare. Acesta dezlănțuie continuu firele de ADN pentru a permite DNA polimerazei să atașeze noi nucleotide.
helicaza ADN este o structură inelară hexamerică formată din șase subunități. Acesta desface dublu helix prin ruperea legăturilor de hidrogen care dețin împreună firele de ADN. După dezarhivare, firul cu gruparea 3'-OH devine catena principală, care poate fi reprodusă imediat. Lanțul cu grupul 5'-OH este o catenă de întârziere și este reprodusă ulterior într-un proces cunoscut sub numele de replicare discontinuă.