Pasul de decolorare este cel mai critic în colorarea Gram. Rezultatul acestei etape se bazează pe cât de ușor este eliberată celula complexului violet-iod de cristal.
Descoperit de dr. Hans Christian Gram în 1884, pata Gram este o pată diferențială utilizată în identificarea bacteriilor. Împărțirea celulelor bacteriene în două grupuri majore (gram pozitive și Gram negative), este un instrument critic în clasificarea și diferențierea bacteriilor. Cele două pete necesare sunt stratul primar și contravântuirea. Decolorarea excesivă determină dispariția petei primare, iar Gram pozitiv apare Gram negativ. Pe de altă parte, sub-decolorarea nu elimină complexul de cristal violent-iod, care cauzează bacterii Gram negative să apară pozitive.
