Care sunt etapele în electroforeza gelului?

Electroforeza gelului este un proces de separare a moleculelor bio de dimensiuni diferite, prin rularea lor printr-o matrice cu sârmă electrică. Moleculele mai mari se mișcă mai lent, în timp ce moleculele mai mici alunecă prin matrice și se deplasează mai repede și mai departe, separând astfel fragmentele diferite pe baza dimensiunilor.

Primul pas pentru electroforeza pe gel este de a seta matricea de gel. Agaroza este utilizată pentru a separa moleculele de ADN, iar acrilamida este utilizată pentru a separa proteinele. Gelul pornește ca un lichid, care este turnat într-o tavă de turnare. Un pieptene este plasat în matricea lichidă astfel încât atunci când matricea se solidifică, godeurile sunt formate pentru a încărca probe în ele. Odată ce gelul sa solidificat, acesta este îndepărtat din matriță și plasat într-un aparat special, unde poate fi aplicat curent. Un tampon care poate acționa ca un conductor al electricității este turnat în jurul matricei.

Mostrele de molecule bio sunt, de obicei, amestecate cu o substanță de înaltă densitate (un colorant vâscos), astfel încât acestea se scufundă în fundul puțului, în loc să plutească în tampon. Colorantul ajută de asemenea la urmărirea progresului experimentului. Fiecare probă este încărcată într-un puț separat. Unul dintre godeuri este de obicei atribuit pentru încărcarea unui marcator, care are un set de fragmente ale căror dimensiuni sunt deja cunoscute pentru a permite compararea cu probele care sunt încărcate.

Atunci când curentul este pornit, probele tind să se deplaseze către partea încărcată pozitiv a aparatului, deoarece fostele coloane fosfatice ale moleculelor conferă o încărcare negativă asupra lor. După ce probele au parcurs o distanță suficientă, matricea este studiată pentru a vedea benzile care se formează prin separarea moleculelor.