Căldură este necesară atunci când colorarea sporelor, deoarece aplicarea căldurii perturbă celulele vegetative și provoacă spălarea verde a malachitelor, ceea ce permite apoi contracararea în celule. Acesta este un pas necesar în anumite spori rezistenți la metodele tradiționale de colorare a sporilor.
Potrivit Austin Community College, colorarea este o tehnică folosită de oamenii de știință pentru a identifica sporii dintr-o probă de bacterii. Unul dintre pașii cei mai importanți în colorarea sporiilor este de a anticipa proprietățile sporii care este analizat, deoarece unele dintre ele sunt rezistente la procesele tradiționale de deces. Adesea, acest lucru este un rezultat al stratului lor dur de proteine, cunoscut sub numele de keratina. Pentru endospori de această natură, este necesar să se utilizeze o tehnică de colorare a căldurii pentru a pata sporii cu pata primară, verde malachit.
Aplicarea căldurii slăbește peretele unei celule și îi permite să fie clătită și permeată de coloranți. Celula originală care formează un endospor este numită celulă vegetativă. Aceste celule sunt mai susceptibile la căldură decât endosporii înșiși și pot fi clătite și vopsite cu verde malachit. Bazându-se pe umflarea și reacțiile endosporilor, acest proces de vopsire poate fi apoi utilizat pentru a identifica sporii care au straturi protectoare puternice.
