Probele de cultură care au vârsta de peste 24 de ore pot pata incorect, pierzându-și capacitatea de a se menține pe pata de cristal violet. Ele pot apărea ca organisme gram-negative atunci când ele sunt de fapt gram-pozitive, sau specimenul poate prezenta un rezultat gram-variabil.
Petele Gram dezvăluie diferențele structurale în pereții celulari ai organismelor din laborator. Organismele gram-pozitive au un perete de celule gros, conținând până la 90% peptidoglican și apare albastru sau violet sub microscop după colorarea cu violet cristal. Organismele gram-negative au un perete celular mai subțire, conținând până la 10% peptidoglican și un conținut ridicat de lipide. Aceste organisme apar roșii sau roz sub microscop după colorarea cu violet cristal.
Pata gram este un test de laborator critic, care este integrat în studiul și tratamentul bolilor infecțioase. Multe antibiotice lucrează fie pe organisme gram-negative, fie pe gram-pozitive, din cauza modului în care sparge pereții celulelor. Spectrul de antibiotice cu spectru larg funcționează atât cu organisme gram-negative cât și gram-pozitive.
Pictura de gram a fost creată de Hans Christian Gram în 1884. El căuta o modalitate de a vizualiza cocci în probele de țesut pulmonar ale celor care au murit de pneumonie. El a folosit cristalul violet ca pete primar, urmat de iod ca fixator și etanol ca decolorant. Pasul de decolorare creează pierderea colorării albastru-purpurie care diferențiază organismele gram-pozitive și negative unul de celălalt.
