Declarația de independență a fost semnată de 56 de persoane. Deși John Hancock, președintele Congresului Continental, a semnat documentul la 4 iulie 1776, majoritatea delegaților le-au adăugat probabil semnăturile pe Aug 2, 1776. Ultimul semnator și-a adăugat numele pe 4 noiembrie 1776.
Semnarea Declarației de Independență a fost un gest simbolic, deoarece a devenit deja oficial prin votul Congresului. Semnătura lui John Hancock nu a fost doar prima, ci și cea mai mare. A fost atât de iconic că numele său a devenit sinonim cu cuvântul "semnătură". Istoricii nu sunt de acord cu privire la faptul dacă majoritatea delegaților au semnat la 4 iulie sau 2 august. Cu toate acestea, unii delegați trebuie să fi semnat mai târziu de 4 iulie, deoarece s-au alăturat Congresului după adoptarea documentului la data de 4 iulie. Ultima persoană care a semnat a fost Matthew Thornton din New Hampshire, care a aderat la Congresul Continental în noiembrie 1776 și a semnat în colțul din dreapta jos al documentului. Cel mai tânăr semnatar a fost Edward Rutledge, la 26 de ani, iar cel mai în vârstă a fost Benjamin Franklin, la 70 de ani.
Nu toți delegații celui de-al doilea Congres continental au semnat Declarația de Independență. Unii au votat împotrivă, în timp ce alții au fost plecați la semnarea documentului. Prima versiune trimisă statelor nu include toate cele 56 de semnături, dar pe 18 ianuarie 1777, Congresul a mandatat ca o altă versiune care includea semnăturile să fie distribuită celor 13 state.