Soluția de iod acționează ca un mordant care face pata mai proeminentă și colorantul violet cristal devine mai strâns legat de celula bacteriană. Adăugarea de soluție de iod sau clorură de potasiu este al doilea pas în gram-colorare.
Colorarea gram este tehnica obișnuită și cea mai răspândită folosită pentru a diferenția bacteriile gram negative și gram pozitive. Acest proces se bazează pe principiul că bacteriile reacționează diferit față de mediul lor, reacționând (sau colorând) diferit, ajutând la identificarea acestora.
Procesul de colorare a granulelor implică următorii pași:
Pasul 1
Bacteria este tratată cu colorantul de violet cristal, apoi cu soluția de iod.
Pasul 2
După pătrundere, agenți de decolorare sunt adăugați la eșantion. Acest lucru deshidratează, micșorează și strânge stratul peptidoglican al bacteriilor. Agenții de colorare sunt prinși în interiorul celulelor bacteriilor gram pozitive din cauza stratului peptidoglican mai gros, în timp ce bacteriile gram negative nu vor putea să păstreze petele datorită stratului său subțire.Pasul 3
Se adaugă un contrastain la specimenul colorat cu roșu. Colorarea roșie nu modifică culoarea culorii violete a celulelor gram pozitive. În schimb, se adaugă o culoare roșie la bacteriile gram negative.