Specificația, cunoscută sub numele de macroevoluție, este susținută de mai multe linii de dovezi, inclusiv observația directă, cartografia genetică și înregistrarea fosilă. Mai multe populații au fost observate în acțiunea de divizare în specii noi. Comparația secvențelor genomice între specii este cel mai ușor de explicat ca urmare a strămoșilor comune recente și o înregistrare bogată a fosilelor a dat naștere numeroaselor fosile tranziționale.
Macroevoluția a fost observată direct într-un tip de plantă înflorită numită capra americană. Introdus în America din Europa la începutul secolului al XX-lea, trei specii de capre au început să se hibridă în sălbăticie. Până în anii 1950, au produs două soiuri noi care ar putea fi cultivate în propria lor populație, dar nu și cu goatsbeards înconjurătoare, care este criteriul pentru a fi etichetate o specie nouă.
Comparația genetică directă între oameni și cimpanzeii oferă mai multe dovezi de speciație. Oamenii au 46 de cromozomi, în timp ce cimpanzeii și gorilele au 48 de ani. Cromozomul 2 uman, cu toate acestea, are secvențe distincte de nucleotide care sugerează că este rezultatul fuziunii dintre doi cromozomi la un moment dat în trecutul relativ recent. Cea mai plauzibilă explicație a acestui fapt este că oamenii și cimpanzeii sunt strâns legați, dar diferă în specii separate.
Recordul fosil este bogat în fosile tranziționale care demonstrează dezvoltarea unor noi specii și a unor grupuri mai mari. În special, tranzițiile de la reptile la mamifere, reptile la păsări și maimuțe la om sunt bine evidențiate de fosile.